Элитные контроллеры (ЭК): кто они
-
впервые слышу о ингибиторе циклин-зависимой киназы Р21
Спасибо, @васьвась, заставил “попотеть”.
Участник @васьвась написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
Пора всем пить аторвастатин, а ЭК - особенно? Снизит ли аторвастатин ВН, поднимет ИС
Если максимально коротко, то in vitro и ex vivo – да, а вот in vivo – нет, ИМХО.
Ну, а если чуть поразвернутей (надеюсь, дочитают больше 2 - 3-х человек)), то:
Для начала разберем, что за «зверь» ингибитор циклинзависимой киназы р21.
При транскрипции с минус-цепи (матричной) ДНК в мРНК, осуществляемой РНК-полимеразой II (в нашем случае) РНК-полимераза II сначала осуществляет инициацию роста мРНК в области промотора (небольшой участок ДНК, с которым связывается полимераза и с которого начинается синтез мРНК). Далее при успешном преодолении этапа инициации (иногда происходят «аборты» и первые неустойчивые растущие цепи РНК из 3-х – 10-и первых нуклеотидов отщепляются и отваливаются от РНК-полимеразы II и она начинает инициацию заново) полимераза иногда (в нашем случае) попадает в «ловушку» в так называемой проксимальной (ближней) области ДНК в районе промотора (т.е. в начале копируемой цепи ДНК происходит «проксимальная пауза» роста мРНК) и для того, чтобы результативно продолжить (а не «сбросить» неполноценную цепь) процесс роста мРНК (элонгироваться) РНК-полимеразе и еще паре белковых факторов необходимо перейти в активное состояние и «профосфорилироваться», т.е. присоединить к себе фосфаты. Данный процесс фосфорилирования осуществляет позитивный транскрипционный фактор удлинения/элонгации b р-TEFb. Но для этого данному элонгационному фактору нужна помощь других молекул. Вот тут мы и приходим к ингибитору циклинзависимой киназы СDK (белковый фермент, который участвует в смене фаз клеточного цикла, а также регулирует транскрипцию и процессинг мРНК) р21.
Данный ингибитор-пептид р21 (его продукция/экспрессия в клетках человека осуществляется (и соответственно кодируется) геном CDKN1A) ингибирует активность циклинзависимой киназы CDK9 (связываясь с комплексом CDK9+циклин), которая активируется тогда, когда в клетке накапливается определенная критическая концентрация циклинов (белков-активаторов) и они (циклины) связываются с ней. Активированный гетеродимер циклин+CDK9 далее, в свою очередь, присоединяется к позитивному транскрипционному фактору удлинения b р-TEFb для РНК-полимеразы II. И далее комплекс циклин+CDK9+р-TEFb фосфорилирует (за счет фосфатов отщепленных до этого киназой у АТФ) С-концевой домен большой субъединицы РНК-полимеразы II (и еще фосфорилирует пару факторов DSIF и NELF), которая за счет этого теперь может результативно продолжить транскрипцию матричной РНК (мРНК) с минус-цепи ДНК клетки (после проксимальной промоторной паузы/ловушки). В том числе данный механизм распространяется и на транскрипцию вирусной (ВИЧ) мРНК из провирусной ДНК. Поэтому ингибитор р21, связываясь с комплексом циклин+CDK9, блокирует его активацию и, как следствие, весь этот вышеописанный процесс.
Иными словами, ингибитор р21 в конечном счете ингибирует синтез мРНК ВИЧ из интегрированной провирусной ДНК в составе ДНК клетки человека. Т.е., если еще проще, ингибирует репликацию ВИЧ.
Теперь для начала разберем первую статью о влиянии р21 на репликацию ВИЧ в CD4+ Т-лимфоцитах элитных контроллеров.
- Для начала ученые провели анализ виремии у участников исследования из 4-х групп: ЭК, виремические контроллеры ВК (медиана 259 копий/мл), ВИЧ-прогрессоры и ВИЧ-негативные. Вполне ожидаемо выявили значительную разницу между ними по процентам зараженных Т-лимфоцитов, и копиям антигена (в виде капсидного белка) р24.
- Далее ученые отсекли остальные факторы, которые могут влиять у ЭК и ВК на контроль виремии (CD8+ клетки убрали, оценили разницу в активации клеток и пр.), инфицирование проводили и Х4- и R5-тропными штаммами.
- Затем определили происходят ли данные различия на ранних стадиях (для этого измеряли количества поздних обратных транскриптов LRT (т.е. тем самым оценивали разницу в эффективности обр. транскрипции), уровни интегрированной ДНК (т.е. тем самым оценивали разницу в эффективности интеграции) и уровни транскриптов мРНК (т.е. тем самым оценивали разницу в эффективности транскрипции мРНК ВИЧ из провирусной ДНК)) в однораундовом цикле репликации.
- Затем зафиксировали повышенные количества у ЭК и ВК фрагментов мРНК, кодируемых геном CDKN1A и соответственно уровни ингибитора р21.
- Затем оценили влияние уровней р21 на репликацию и выявили зависимость пониженной репликации в зависимости от повышения уровней р21.
- Затем определили влияние р21 на уровни LRT, инт.ДНК ВИЧ и мРНК CDKN1A для этого ингибировали ингибитор р21 и наблюдали повышение уровней LRT, инт.ДНК ВИЧ и мРНК CDKN1A.
- Затем на основании сравнения соотношений инт.ДНК ВИЧ /LRT, мРНК/LRT, мРНК/инт.ДНК до ингибирования р21 и после ингибирования р21 у ЭК и ВИЧ-негативных определили, что р21 влияет на уровни LRT и мРНК. Стало быть, вывод, что повышение уровня р21 понижает обратную транскрипцию и транскрипцию мРНК ВИЧ, но не влияет на интеграцию.
- Также экспериментально определили, что р21 связывается с CDK9 и что за счет этого тормозит деятельность р-TEFb (интересно, на мой взгляд, они проделали такой вывод: взяли заингибировали р21 и сравнили количество проксимальных (ближних) транскриптов мРНК и количество дистальных (дальних) транкриптов мРНК до ингибирования и после и определили, что проксимальные фрагменты мРНК увеличились в 2 раза, а дистальные в 6 раз после блокировки р21, т.е. вывод такой, что именно элонгация влияет на транкрипцию мРНК (т.е. паузы в элонгации транскрипции сильнее влияют чем паузы инициации)).
Итого, в сухом остатке: ученые на моделях in vitro и ex vivo определили, что у ЭК и ВК имеются повышенные уровни ингибитора р21 и что они ощутимо влияют на пониженную репликацию ВИЧ в том числе (наряду с другими факторами у ЭК). Также отметили, что повышенные уровни р21 влияют на обр. транскрипцию и на транскрипцию, однако признали, что механизм торможения обр. транскрипции в отличие от транскрипции объяснить не могут. Признали также, что неясно эта особенность у ЭК (повышенный уровень р21 в клетках) врожденная или приобретенная в результате ВИЧ-инфекции.
Теперь перейдем к аторвастатину:
По аторвастатину в условиях in vitro ученые также доказали, что:- Его влияние на понижение репликации ВИЧ в CD4+ Т-лимфоцитах.
- Его влияние на повышение уровня ингибитора циклинзависимой киназы р21 в CD4+ Т-лимфоцитах.
- Его влияние на понижение репликации ВИЧ вызвано его воздействием по мевалонатному пути на повышение уровня ингибитора циклинзависимой киназы р21 в CD4+ Т-лимфоцитах.
Выводы: и все бы ничего, т.е. результаты 1-го и 2-го исследования вроде бы показали, что:
- у ЭК, как минимум, частично контроль над репликацией ВИЧ вызван повышенными уровнями р21 в клетках
- и что применение аторвастатина также должно повышать его (р21) и, как следствие, понижает репликацию ВИЧ.
- но вот результаты данного 8-и недельного рандомизированного исследования уже в условиях in vivo показали, что там аторвастатин не влияет на понижение вирусной нагрузки. Т.е., значит, есть вопросы и по влиянию р21 на понижение ВН и его метаболизму в условиях живого человеческого организма.
P.S. ну а касательно целесообразности применения аторвастатина у ЭК, даже если не брать в расчет последнее обозначенное исследование и предположить, что он (аторвастатин) влияет на повышение ингибитора р21 in vivo, то получается следующая картина:
- У ЭК и так имеется повышенный фон р21 в организме.
- Имеются данные, что повышенный фон р21 в клетках ЭК , частично, наряду с другими факторами организма ЭК, понижает виремию ВИЧ.
- Таким образом, добавляя аторвастатин, мы стремимся повысить и без того повышенный уровень р21 у ЭК в надежде добиться еще лучших результатов по понижению репликации ВИЧ в латентно-инфицированных клетках. Т.е. предположим, вклад повышенного уровня р21 у ЭК в контроль над ВИЧ-инфекцией составляет 30%. Предположим, что мы, добавив аторвастатин, добились еще повышения уровня р21 на 20%, то получится общий вклад в контроль над ВИЧ-инфекцией увеличится у ЭК на 0,3х0,2х100% = 6%. Всего-то.
-
@gremlin в целях повышения образованности если сложно расшифруйте что значит ВИЧ негативные.
Участник @vovan3103 написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
что значит ВИЧ негативные.
Ок, приму за чистую монету - это значит, люди без вич.
-
Участник @vovan3103 написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
что значит ВИЧ негативные.
Ок, приму за чистую монету - это значит, люди без вич.
-
@gremlin дело как бы даже не в монете. Есть же люди у которых на терапии перестают вырабатываться антитела. И если четвёртая группа была из здоровых людей зачем тогда им принимать участие в исследовании.
Участник @vovan3103 написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
если четвёртая группа была из здоровых людей зачем тогда им принимать участие в исследовании
Потому, что нужна группа сравнения. За участие в исследовании обычно что-то платят, а некоторые участвуют pro bono т.к. считают это своим вкладом в некое общее благо.
-
Участник @maro написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
Если ПЦР ДНК достоверен то надежды увы нет
Интересно измерить объём Вашего резервуара, сделать ПЦР ДНК количественный. Человек, который делает эти анализы говорил, что ему только однажды встретился пациент, у которого ПЦР ДНК ниже порога определения (5 копий на миллион мононуклеаров), а ИБ при этом плюсует…
@h-clinic добрый день. А где такой анализ делается на определение резервуара? ДНК я делала количественный не только в СЦ, но и в КДЛ, там результат пришел менее 50 по-моему, если пересчитать у них в степенях пришло и никто не мог точно мне пояснить в лаборатории какое количество. У нас в городе с этим все грустненько к сожалению.
-
@h-clinic добрый день. А где такой анализ делается на определение резервуара? ДНК я делала количественный не только в СЦ, но и в КДЛ, там результат пришел менее 50 по-моему, если пересчитать у них в степенях пришло и никто не мог точно мне пояснить в лаборатории какое количество. У нас в городе с этим все грустненько к сожалению.
Участник @лисенок написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
ДНК я делала количественный не только в СЦ, но и в КДЛ, там результат пришел менее 50 по-моему, если пересчитать у них в степенях пришло и никто не мог точно мне пояснить в лаборатории какое количество
Добрый день.
Анализ ПЦР ДНК количественный в МНПК можно сделать только через нас. Вы видимо сдавали сдавали анализ по РНК:
“ИССЛЕДОВАНИЕ 12.18.A2.202 РНК ВИЧ (кровь), количественно. Чувствительность метода 20 МЕ/мл. (1 МЕ=0,58 копий РНК)”
Он показывает количество копий вируса в 1мл крови.
P.S.
Судя по всему, KDL и Склифлаб используют одинаковые тест-системы. От Склифлаба информацию получить не удается. Напишите, пожалуйста, какая тест-система указана у Вас в результатах анализа… -
Участник @лисенок написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
ДНК я делала количественный не только в СЦ, но и в КДЛ, там результат пришел менее 50 по-моему, если пересчитать у них в степенях пришло и никто не мог точно мне пояснить в лаборатории какое количество
Добрый день.
Анализ ПЦР ДНК количественный в МНПК можно сделать только через нас. Вы видимо сдавали сдавали анализ по РНК:
“ИССЛЕДОВАНИЕ 12.18.A2.202 РНК ВИЧ (кровь), количественно. Чувствительность метода 20 МЕ/мл. (1 МЕ=0,58 копий РНК)”
Он показывает количество копий вируса в 1мл крови.
P.S.
Судя по всему, KDL и Склифлаб используют одинаковые тест-системы. От Склифлаба информацию получить не удается. Напишите, пожалуйста, какая тест-система указана у Вас в результатах анализа… -
@h-clinic добрый вечер. Да действительно в результате написано ПЦР РНК ВИЧ 1 количественно менее 10*2 ме/мл. И сколько это в копиях так мне и пояснили…
-
@h-clinic добрый вечер. Да действительно в результате написано ПЦР РНК ВИЧ 1 количественно менее 10*2 ме/мл. И сколько это в копиях так мне и пояснили…
-
@лисенок 100 копий и есть скорее всего. У более или менее актуальных систем в отношении РНК ВИЧ МЕ = копии.
-
@ilya-antipin там стоит значок меньше перед 10 Поэтому меньше 100.
-
-
-
@васьвась Я раз в 3 месяца мониторю нагрузку, как в СЦ- там 250 тесты, так и платных лабораториях, где тест системы 50 или 20 копий. Делаю параллельно в один день.
@лисенок вот у меня в СЦ 3 раза была неопределяемая ВН(<250), а через 3 недели после последнего сдал еще в лаборатории КДЛ с порогом 20МЕ и показало 530 копий/мл. Глюк теста в КДЛ? Инфицирован 10 лет(или чуть больше) и терапию никогда не пил, а ИС и ВН только последний год мониторить стал. ИС-800-1000, ВН-НО(250 копий)
-
Какое правильное питание:) не надо сейчас тут тролить что все вот так прямо придерживаются принципа ПП… ладно не буду обобщать, но грешу и фаст фудом и вкуснейшими хинкалами и хачапури в Тбилисо, и невероятными жирными антрекотиками в бакинских кабабных и сочными лахмаджунами в Турции и т.д… не надо просто фанатеть , во всем чувство меры надо знать
-
@h-clinic добрый вечер. Да действительно в результате написано ПЦР РНК ВИЧ 1 количественно менее 10*2 ме/мл. И сколько это в копиях так мне и пояснили…
Участник @лисенок написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
@h-clinic добрый вечер. Да действительно в результате написано ПЦР РНК ВИЧ 1 количественно менее 10*2 ме/мл. И сколько это в копиях так мне и пояснили…
сдавал 3 дня назад в КДЛ, вот как следует интерпретировать результат:
1)не обнаружено-это значит <20 МЕ/мл
2)менее 102 МЕ/мл-это значит, что от 20 до 100 МЕ,но точное число не может тест подсчитать
3)ну и если больше 100, то указывают точное количество
4) при ВН>108(10 миллионов)-то же самое ,как в случае№2, только не могут указать точно число,указывают, что более 10млн. копий.
-
-
-
Метаболические преимущества ЭК
Чё пацики, айда за IL-21.
Участник @васьвась написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
IL-21
При синдроме Сезари навалом IL-21.
И это боян по сути.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17192392/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21047960/ -
Участник @васьвась написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
IL-21
При синдроме Сезари навалом IL-21.
И это боян по сути.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17192392/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21047960/Участник @ilya-antipin написал в Элитные контроллеры (ЭК): кто они:
И это боян по сути.
INRS - серьезная организация и плагиатить не должна. Может они более глубоко проработали старые идеи?
Здравствуйте! Похоже, вам интересна эта беседа, но у вас пока нет учетной записи.
Вы устали просматривать одни и те же посты каждый раз, когда заходите на сайт? После регистрации, вам не придётся искать обсуждения в которых вы принимали участие, настройте уведомления о новых сообщениях так как вам это удобно (по электронной почте или уведомлением). У вас появится возможность сохранять закладки и ставить лайки постам, чтобы выразить свою благодарность другим участникам сообщества.
С вашими комментариями этот пост может стать ещё лучше 💗
Зарегистрироваться Войти